GDF-11 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400969-ACT

成長分化因子11（GDF11；GDF-11）は、分泌型のTGF-βスーパーファミリーリガンドであり、アクチビンII型およびI型受容体を介してシグナルを伝達し、SMAD2/3依存的な転写プログラムを活性化します。ヒト細胞においてGDF11は、発生パターニング、細胞運命決定、組織恒常性を制御し、増殖、分化、細胞外マトリックスのリモデリングに下流効果を及ぼします。GDF11の発現やシグナル伝達の変化は、筋や心臓のリモデリング、神経発生過程、ならびに上皮間葉転換（EMT）や間質との相互作用といったがん関連経路の文脈で研究されています。循環性のモルフォゲン様因子として、GDF11は傍分泌シグナル伝達のダイナミクスや、受容体媒介性経路間のクロストークを検討する目的にも用いられます。

GDF-11 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GDF11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GDF-11 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GDF11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGDF11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GDF-11の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGDF11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGDF-11依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGDF11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGDF-11経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。