GCSH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406784

Panoramica

GCSH codifica la proteina H del sistema di scissione della glicina, un trasportatore mitocondriale contenente lipoato che trasferisce gli intermedi di reazione tra la glicina decarbossilasi (proteina P), l’aminometiltransferasi (proteina T) e la diidrolipoammide deidrogenasi (proteina L). Attraverso questo complesso multienzimatico, GCSH sostiene il catabolismo della glicina e il metabolismo dei composti a un carbonio, accoppiando la degradazione della glicina al trasferimento, dipendente dal folato, di unità carboniose, collegando così il turnover mitocondriale degli amminoacidi all’omeostasi redox e metabolica cellulare. Alterazioni dell’attività di scissione della glicina sono associate a una funzione mitocondriale modificata e a uno sbilanciamento del flusso glicina/serina, processi rilevanti per la disregolazione neurometabolica. In quanto nodo che connette l’enzimologia dipendente dal lipoato con le vie mediate dal folato, GCSH è spesso studiato nel contesto del metabolismo mitocondriale, delle risposte allo stress ossidativo e degli errori congeniti del metabolismo della glicina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GCSH (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GCSH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GCSH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GCSH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GCSH.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GCSH per lo studio della segnalazione di GCSH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GCSH critici per la funzione di GCSH
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GCSH per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GCSH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GCSH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GCSH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GCSH Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GCSH (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GCSH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GCSH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.