GCNT3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411258-ACT

GCNT3 umano (glucosaminil (N-acetil) transferasi 3) codifica una glicosiltransferasi localizzata nell’apparato di Golgi che estende gli O-glicani catalizzando la formazione delle strutture core 2 e core 4 su glicoproteine di tipo mucinico. Rimodellando la ramificazione dei glicani, GCNT3 influenza la differenziazione epiteliale, le proprietà della barriera mucosale e le interazioni cellula–cellula o cellula–matrice che dipendono dal riconoscimento di glicoproteine e glicolipidi. La sua attività si interseca con le reti di O-glicosilazione che plasmano la stabilità dei recettori, il loro traffico intracellulare e il riconoscimento immunitario, collegando GCNT3 a vie che regolano l’adesione e la segnalazione infiammatoria. Alterazioni dell’espressione di GCNT3 o dei pattern di glicosilazione sono state riportate in molteplici contesti patologici epiteliali, inclusi i tumori, in cui cambiamenti nelle glicoforme delle mucine possono influenzare l’invasione, i fenotipi associati alla metastasi e le interazioni tra tumore e microambiente.

GCNT3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GCNT3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GCNT3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GCNT3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GCNT3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GCNT3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GCNT3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GCNT3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GCNT3 nelle cellule tumorali con espressione di GCNT3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.