GCNT3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411258-ACT

O GCNT3 humano (glucosaminil (N-acetil) transferase 3) codifica uma glicosiltransferase localizada no complexo de Golgi que estende O-glicanos ao catalisar a formação de estruturas core 2 e core 4 em glicoproteínas do tipo mucina. Ao remodelar a ramificação dos glicanos, o GCNT3 influencia a diferenciação epitelial, as propriedades de barreira da mucosa e as interações célula–célula ou célula–matriz que dependem do reconhecimento de glicoproteínas e glicolipídios. Sua atividade se cruza com redes de O-glicosilação que moldam a estabilidade e o tráfego de receptores, bem como o reconhecimento imune, ligando o GCNT3 a vias que regulam a adesão e a sinalização inflamatória. Alterações na expressão do GCNT3 ou nos padrões de glicosilação foram relatadas em múltiplos contextos de doenças epiteliais, incluindo cânceres, nos quais mudanças nas glicoformas de mucinas podem afetar a invasão, fenótipos associados à metástase e as interações entre o tumor e o microambiente.

GCNT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GCNT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GCNT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GCNT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GCNT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GCNT3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GCNT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GCNT3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GCNT3 em células tumorais com expressão de GCNT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.