Plasmide CRISPR d'Activation (h) GCET2: sc-418185-ACT

GCSAM (également appelé GCET2) est une protéine adaptatrice associée aux lymphocytes, enrichie dans les cellules B du centre germinatif et d’autres lignées hématopoïétiques, où elle soutient des voies de signalisation liées à l’engagement du récepteur des cellules B et au remodelage du cytosquelette. En couplant des signaux proximaux au récepteur à la dynamique de l’actine et au comportement migratoire, GCET2 a été impliquée dans la régulation de l’activation des cellules immunitaires, de l’adhérence et du trafic au sein des microenvironnements lymphoïdes. Des profils d’expression altérés ont été rapportés dans des contextes de malignités des cellules B, faisant de ce gène un marqueur utile et un nœud mécanistique pour l’étude des voies qui façonnent la biologie du centre germinatif et la transformation maligne. L’étude fonctionnelle de GCSAM aide à relier les états transcriptionnels à des modifications de l’amplitude de la signalisation, de la motilité cellulaire et des interactions avec le microenvironnement immunitaire.

GCET2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GCSAM sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GCET2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GCSAM dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GCSAM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GCET2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GCSAM natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GCET2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GCET2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GCSAM silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.