GCC2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411304-ACT

Il gene umano **GCC2** (GRIP and coiled-coil domain containing 2) codifica una proteina periferica del Golgi che si localizza nel **trans-Golgi network**, dove partecipa all’ancoraggio delle vescicole e al traffico di membrana, processi importanti per lo smistamento del carico e per il mantenimento dell’architettura del Golgi. Attraverso interazioni con i macchinari di traffico regolati da piccole GTPasi, GCC2 contribuisce alla dinamica del trasporto endosoma–Golgi, che modella la maturazione delle proteine e la secrezione. L’alterazione delle vie di ancoraggio e traffico del Golgi è ampiamente rilevante per l’omeostasi cellulare, includendo risposte allo stress, polarità e programmi di secrezione regolata. Cambiamenti nell’espressione o nella funzione di tether a coiled-coil associati al Golgi, come GCC2, sono stati studiati nel contesto di patologie in cui il traffico di membrana e la secrezione risultano disregolati, tra cui il cancro e processi legati alla neurodegenerazione.

GCC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GCC2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GCC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GCC2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GCC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GCC2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GCC2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GCC2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GCC2 nelle cellule tumorali con espressione di GCC2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.