GATA-6 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420498-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GATA-6 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- GATA-6 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal GATA-6 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal GATA-6 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Gata6. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GATA-6 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-420498-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
GATA-6 Plasmide di attivazione CRISPR (m2) | sc-420498-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Il gene murino Gata6 codifica il fattore di trascrizione a dita di zinco GATA-6, un regolatore determinante di linea del sviluppo endodermico e della differenziazione epiteliale in tessuti quali polmone, pancreas, intestino e cuore. GATA-6 si lega ai motivi GATA in enhancer e promotori per coordinare programmi genici coinvolti nella morfogenesi, nella specificazione del destino cellulare e nel mantenimento degli stati differenziati, spesso integrandosi con reti di segnalazione associate a Wnt, BMP/TGF-β, FGF e Notch. Nella biologia dell’adulto, un’attività alterata di GATA-6 è collegata a processi di differenziazione e rimodellamento deregolati che influenzano l’omeostasi degli organi e le risposte allo stress. Pattern di espressione aberranti sono stati studiati in contesti che includono malformazioni congenite e riprogrammazione trascrizionale oncogenica, rendendo Gata6 un nodo utile per indagini meccanicistiche sui circuiti di regolazione genica rilevanti per lo sviluppo e la malattia.
GATA-6 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gata6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
GATA-6 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gata6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gata6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GATA-6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gata6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GATA-6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GATA-6 nelle cellule tumorali con espressione di Gata6 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.