Gastrin Plasmide Double Nickase (h): sc-403220-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Gastrin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Gastrin Double Nickase Plasmid (h) e il Gastrin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GAST. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Gastrin Antibody (B-10): sc-28302
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Gastrin Plasmide Double Nickase (h) | sc-403220-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gastrin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403220-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano GAST codifica la gastrina, un ormone peptidico prodotto prevalentemente dalle cellule G gastriche che regola la secrezione di acido gastrico e sostiene la crescita della mucosa. Dopo la maturazione da preprogastrina a peptidi di gastrina amidati bioattivi, agisce principalmente attraverso il recettore CCKBR, attivando segnali intracellulari che includono le vie PLC/PKC e MAPK/ERK, le quali coordinano l’attività secretoria, la proliferazione epiteliale e la differenziazione. Una produzione o una segnalazione della gastrina deregolata è stata associata a condizioni di ipersecrezione gastrica ed è frequentemente studiata nel contesto dell’infiammazione gastrointestinale, della biologia dei tumori neuroendocrini e della carcinogenesi gastrica e colorettale. In quanto nodo chiave della segnalazione endocrina intestinale, GAST è ampiamente utilizzato per modellare programmi di secrezione dipendenti dallo stimolo e risposte trascrizionali accoppiate a recettori nei sistemi gastrointestinali.
Gastrin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GAST nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GAST. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GAST. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GAST interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.