Gastrin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403220

Panoramica

GAST codifica la gastrina, un pro-ormone che viene processato in peptidi bioattivi in grado di regolare la secrezione di acido gastrico e di coordinare crescita e differenziamento della mucosa nel tratto gastrointestinale. Legandosi al recettore della colecistochinina B (CCKBR), la gastrina attiva reti di segnalazione accoppiate a proteine G, incluse le vie PLC/IP3/Ca2+, PKC e MAPK/ERK, influenzando la funzione secretoria e la proliferazione epiteliale. Una produzione o una segnalazione della gastrina disregolata è associata ad alterazioni della fisiologia gastrica ed è stata studiata nel contesto di ipergastrinemia, biologia neuroendocrina gastrica e rimodellamento associato all’infiammazione. In quanto gene dell’asse ormonale intestinale, GAST rappresenta un utile punto di partenza per analizzare la comunicazione endocrino-paracrina e i programmi trascrizionali a valle in sistemi modello gastrici e pancreatici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Gastrin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GAST in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GAST insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GAST a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Gastrin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GAST per lo studio della segnalazione di Gastrin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GAST critici per la funzione di Gastrin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GAST per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Gastrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Gastrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GAST. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Gastrin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Gastrin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GAST per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GAST definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.