GAP1^m CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-431130

개요

Rasa2는 Ras GTPase-활성화 단백질인 GAP1m을 암호화하며, Ras 신호를 음성 조절하는 인자로서 GTP 가수분해를 촉진해 MAPK/ERK 및 PI3K/AKT 경로의 출력이 과도해지지 않도록 제한합니다. GAP1m은 Ras 활성의 크기와 지속 시간을 조절함으로써 세포주기 진행, 분화 신호, 그리고 이동과 부착을 형성하는 세포골격 역학에 영향을 미칩니다. 마우스 모델에서 Rasa2 기능의 변화는 성장인자 신호의 이상 조절 및 비정상적인 면역·발달 표현형과 연관되어 보고되어 왔으며, 질병 관련 맥락에서 Ras 구동성 신호 네트워크 재배선을 연구하는 데 중요합니다. 또한 신호 ‘브레이크’로서의 위치는 경로 피드백, 신호 통합, 그리고 맥락 의존적인 Ras 이펙터 활성화에 대한 기전 연구를 뒷받침합니다.

GAP1m CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Rasa2 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Rasa2 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Rasa2의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 GAP1m 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 GAP1m 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Rasa2 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• GAP1m 기능에 중요한 Rasa2 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Rasa2 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• GAP1m CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 GAP1m CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Rasa2 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  GAP1m HDR 플라스미드 (m) 및 GAP1m HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Rasa2 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Rasa2 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.