GAP-43 Plasmide Double Nickase (h): sc-400632-NIC

GAP43 umano codifica la proteina associata alla crescita 43 (GAP-43), una fosfoproteina associata alla membrana e arricchita nei neuroni, che regola l’estensione degli assoni, la motilità del cono di crescita e la plasticità sinaptica. GAP-43 è un importante substrato della protein chinasi C e partecipa al rimodellamento del citoscheletro e alla dinamica di vescicole e membrane attraverso un controllo dipendente dalla fosforilazione dell’organizzazione dell’actina e della segnalazione a livello della membrana plasmatica. La sua espressione è regolata durante lo sviluppo e viene nuovamente indotta in risposta a lesioni neuronali, collegando GAP-43 alle vie che governano la rigenerazione dei neuriti e il raffinamento dei circuiti dipendente dall’attività. Alterazioni dei livelli di GAP-43 o del suo stato di fosforilazione sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, rendendola un marcatore frequentemente studiato e un nodo meccanicistico nelle ricerche sulla connettività e la riparazione neuronale.

GAP-43 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GAP43 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GAP43. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GAP43. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GAP43 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.