GALT Plasmide Double Nickase (h): sc-405717-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GALT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GALT Double Nickase Plasmid (h) e il GALT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GALT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GALT Antibody (G-1): sc-365577
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GALT Plasmide Double Nickase (h) | sc-405717-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GALT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405717-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GALT** codifica la galattosio-1-fosfato uridililtransferasi, un enzima citosolico chiave della via di Leloir che converte galattosio-1-fosfato e UDP-glucosio in glucosio-1-fosfato e UDP-galattosio. Questa reazione mantiene l’utilizzo del galattosio, sostiene le riserve di UDP-galattosio necessarie per la biosintesi di glicoproteine e glicolipidi e contribuisce a preservare l’omeostasi metabolica cellulare. L’alterazione dell’attività di GALT porta a un accumulo tossico di galattosio-1-fosfato e metaboliti correlati, collegando il gene agli errori congeniti del metabolismo dei carboidrati, come la galattosemia classica. Di conseguenza, GALT è ampiamente studiato nelle risposte allo stress metabolico, nella vulnerabilità epatica e neuronale e nei processi di segnalazione e traffico dipendenti dai glicoconiugati.
GALT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GALT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GALT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GALT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GALT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.