GalNAc-T13 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407103

Panoramica

GALNT13 codifica la polipeptide N-acetilgalattosaminiltransferasi 13 (GalNAc-T13), un enzima iniziatore della O-glicosilazione di tipo mucinico residente nel Golgi, che trasferisce GalNAc su residui di serina/treonina di proteine secretorie e di membrana nascenti. Modellando i pattern degli O-glicani su recettori, molecole di adesione e mucine, GalNAc-T13 può influenzare la stabilità proteica, il traffico intracellulare e le interazioni con i ligandi, che convergono in processi di segnalazione e comunicazione cellula-cellula. Un’espressione alterata di GALNT13 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è associata a cambiamenti dei comportamenti delle cellule maligne, come invasività e potenziale metastatico, in linea con un ruolo della O-glicosilazione nel rimodellamento dell’interfaccia extracellulare. Questo gene è quindi rilevante per studi sulla biosintesi delle glicoproteine, sul funzionamento della via secretoria e sulle reti di segnalazione regolate dalla glicosilazione nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GalNAc-T13 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GALNT13 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GALNT13 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GALNT13 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GalNAc-T13.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GALNT13 per lo studio della segnalazione di GalNAc-T13, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GALNT13 critici per la funzione di GalNAc-T13
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GALNT13 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GalNAc-T13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GalNAc-T13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GALNT13. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GalNAc-T13 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GalNAc-T13 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GALNT13 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GALNT13 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.