galectin-7 Plasmide Double Nickase (h): sc-417196-NIC

LGALS7 codifica la galectina-7, una lectina legante i β-galattosidi arricchita negli epiteli stratificati, che contribuisce alla differenziazione dei cheratinociti, alle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice e alla regolazione dell’apoptosi. La galectina-7 modula la segnalazione dipendente dai glicani sulla superficie cellulare e nel citosol, influenzando vie associate all’omeostasi epiteliale, alle risposte allo stress e al rimodellamento infiammatorio. Un’espressione alterata di LGALS7 è stata associata a una disregolazione della funzione di barriera epidermica e a effetti dipendenti dal contesto sulla sopravvivenza e sulla migrazione cellulare nelle patologie epiteliali, inclusi fenotipi rilevanti per il cancro. Queste proprietà rendono la galectina-7 un nodo utile per studiare la segnalazione mediata dai glicani, lo sviluppo epiteliale e la regolazione del destino cellulare da parte del microambiente.

galectin-7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LGALS7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LGALS7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LGALS7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LGALS7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.