galectin-3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421416-LAC

Il gene murino Lgals3 codifica la galectina-3, una lectina legante β-galattosidi che regola le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice, il clustering dei recettori dipendente dai glicani e il traffico endocitico nei compartimenti immunitari e stromali. La galectina-3 influenza l’attivazione dei macrofagi, la chemiotassi dei neutrofili e i programmi dei fibroblasti e delle cellule epiteliali modulando processi legati alla segnalazione di NF-κB, alle risposte TLR, alla segnalazione integrina/FAK e al rimodellamento associato a TGF-β. Attraverso ruoli intracellulari nel controllo dell’apoptosi e dell’autofagia ed extracellulari nell’adesione e nelle reti citochiniche, contribuisce a plasmare microambienti infiammatori e pro-fibrotici. L’espressione deregolata di Lgals3/galectina-3 è frequentemente studiata in modelli di infiammazione cronica, fibrosi, disfunzione metabolica e regolazione immunitaria associata ai tumori.

Le particelle di attivazione lentivirale galectin-3 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Lgals3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale galectin-3 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Lgals3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di galectin-3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Lgals3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.