galectin-3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421416-ACT

Il gene murino **Lgals3** codifica la **galectina-3**, una lectina legante i β-galattosidi che si localizza nel citoplasma, nel nucleo, sulla superficie cellulare e nell’ambiente extracellulare, dove regola le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. La galectina-3 modula la segnalazione dipendente dai glicani che influenza adesione, migrazione, fagocitosi e risposte citochiniche infiammatorie, con ruoli documentati nell’attivazione dei macrofagi e nella biologia dei fibroblasti. Interseca inoltre vie che controllano la resistenza all’apoptosi, l’endocitosi e la segnalazione dell’immunità innata, incluse le risposte guidate da recettori di riconoscimento di pattern. Un’espressione deregolata della galectina-3 è associata a rimodellamento tissutale e fibrosi, interazioni tumore–stroma e stati infiammatori cronici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in sistemi modello rilevanti per la malattia.

galectin-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Lgals3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

galectin-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Lgals3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Lgals3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di galectin-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Lgals3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da galectin-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via galectin-3 nelle cellule tumorali con espressione di Lgals3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.