galectin-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400941-ACT

LGALS1 codifica la galectina-1 umana, una lectina legante i β-galattosidi che regola le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice attraverso il legame con recettori glicosilati sulla superficie cellulare e nella matrice extracellulare. La galectina-1 influenza l’adesione mediata dalle integrine, la segnalazione delle cellule immunitarie e le risposte allo stress, e può modulare in modo dipendente dal contesto apoptosi, migrazione e programmi angiogenici. Tramite i suoi effetti sul clustering e sulla segnalazione dei recettori dipendenti dai glicani, la galectina-1 incide su vie collegate a infiammazione, comunicazione tumore–stroma e rimodellamento tissutale. Un’espressione deregolata di LGALS1 è stata associata a fenotipi di evasione immunitaria, processi fibrotici e progressione in molteplici tipi di cancro, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico nella ricerca focalizzata sul microambiente.

galectin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LGALS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

galectin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LGALS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LGALS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di galectin-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LGALS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da galectin-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via galectin-1 nelle cellule tumorali con espressione di LGALS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.