GADD 34 Plasmide Double Nickase (h): sc-400595-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GADD 34 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GADD 34 Double Nickase Plasmid (h) e il GADD 34 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PPP1R15A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GADD 34 Antibody (B-10): sc-373815
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GADD 34 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400595-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GADD 34 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400595-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP1R15A codifica GADD34, una subunità regolatoria inducibile della protein fosfatasi 1 che promuove la defosforilazione di eIF2α per terminare la risposta integrata allo stress e ripristinare la traduzione dopo uno stress cellulare. GADD34 viene sovraespresso a valle dello stress del reticolo endoplasmatico (ER) e dei segnali di danno al DNA e modula la proteostasi, la suscettibilità all’apoptosi e il controllo a feedback della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR). Attraverso il controllo della dinamica di fosforilazione di eIF2α, PPP1R15A influenza i programmi trascrizionali associati ad ATF4/CHOP e il rimodellamento adattativo dell’espressione genica in condizioni di stress. La disregolazione di questo asse è stata collegata a stati patologici caratterizzati da stress cronico dell’ER e da una tolleranza allo stress alterata, a supporto del suo studio nella neurodegenerazione, nello stress metabolico e nella biologia delle cellule tumorali.
GADD 34 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PPP1R15A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PPP1R15A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PPP1R15A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PPP1R15A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.