Plásmido Doble Nickase (h) GADD 34: sc-400595-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GADD 34 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GADD 34 (h) y el plásmido de doble nickasa GADD 34 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PPP1R15A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GADD 34 Anticuerpo (B-10): sc-373815
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GADD 34 | sc-400595-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GADD 34 | sc-400595-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP1R15A codifica GADD34, una subunidad reguladora inducible de la proteína fosfatasa 1 que favorece la desfosforilación de eIF2α para dar por terminada la respuesta integrada al estrés y restaurar la traducción tras el estrés celular. GADD34 se sobreexpresa aguas abajo de las vías de señalización del estrés del retículo endoplásmico (RE) y del daño en el ADN, y modula la proteostasis, la susceptibilidad a la apoptosis y el control por retroalimentación de la respuesta a proteínas mal plegadas. Al controlar la dinámica de fosforilación de eIF2α, PPP1R15A influye en programas transcripcionales asociados a ATF4/CHOP y en la remodelación adaptativa de la expresión génica frente al estrés. La desregulación de este eje se ha vinculado con estados patológicos caracterizados por estrés crónico del RE y tolerancia alterada al estrés, lo que respalda su estudio en neurodegeneración, estrés metabólico y biología del cáncer.
GADD 34 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PPP1R15A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PPP1R15A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PPP1R15A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PPP1R15A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.