Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) G6PD: sc-401019-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)G6PD consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa G6PD (h) y el plásmido de doble nickasa G6PD (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a G6PD. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: G6PD Anticuerpo (G-12): sc-373886
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) G6PD | sc-401019-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) G6PD | sc-401019-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano G6PD codifica la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, la enzima limitante de la vía oxidativa de las pentosas fosfato, que genera NADPH y ribosa-5-fosfato. El NADPH respalda la biosíntesis reductora y mantiene el glutatión en estado reducido, vinculando la actividad de G6PD con la homeostasis redox celular y la protección frente al estrés oxidativo. La función de G6PD influye en el flujo metabólico, la síntesis de nucleótidos y las respuestas a las especies reactivas de oxígeno en eritrocitos y en muchos tipos celulares proliferativos. La variación genética o la reducción de la actividad enzimática se asocia con la deficiencia de G6PD y puede modular la susceptibilidad al daño oxidativo y al estrés hemolítico en contextos específicos, lo que convierte a G6PD en una diana central para el estudio de la biología redox y el metabolismo.
G6PD El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus G6PD en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de G6PD. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de G6PD. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con G6PD alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.