G3BP2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403630-LAC

G3BP2 (fattore 2 di assemblaggio dei granuli di stress G3BP) è una proteina legante l’RNA che funge da impalcatura centrale per la nucleazione dei granuli di stress e per lo smistamento degli mRNA, coordinando la stabilità dei trascritti e la traduzione durante lo stress cellulare. Partecipa a reti di regolazione post-trascrizionale collegate alla segnalazione dell’interferone, alle risposte immunitarie innate e all’adattamento allo stress ossidativo e allo stress del reticolo endoplasmatico, con effetti a valle sulla progressione del ciclo cellulare e sulle vie di sopravvivenza. Attraverso interazioni con componenti della segnalazione e del metabolismo dell’RNA, G3BP2 contribuisce ad accoppiare gli stimoli ambientali al rimodellamento dei ribonucleoproteici e al controllo della traduzione. La disregolazione della dinamica dei granuli di stress e dell’omeostasi dell’RNA che coinvolge G3BP2 è stata associata a processi rilevanti per la malattia, tra cui la tolleranza allo stress delle cellule tumorali, l’aggregazione proteina/RNA correlata alla neurodegenerazione e la segnalazione infiammatoria.

Le particelle di attivazione lentivirale G3BP2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di G3BP2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale G3BP2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione G3BP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di G3BP2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo G3BP2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.