FXR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402570-ACT

FXR1 (fragile X mental retardation syndrome-related protein 1) è una proteina legante l’RNA che regola l’espressione genica post-trascrizionale controllando stabilità, localizzazione e traduzione degli mRNA. Si associa a complessi ribonucleoproteici e a granuli da stress, integrando segnali di diversa natura con il metabolismo dell’RNA per modulare l’assetto del proteoma durante proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. FXR1 contribuisce all’organizzazione del citoscheletro e al controllo del ciclo cellulare modulando la traduzione di trascritti rilevanti per specifiche vie di segnalazione, collegando la regolazione dell’RNA a processi quali migrazione e sopravvivenza cellulare. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di FXR1 sono state implicate in ambiti di biologia tumorale e in fenotipi neuromuscolari e neuroevolutivi, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici sulle reti di regolazione dell’RNA.

FXR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FXR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FXR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FXR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FXR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FXR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FXR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FXR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FXR1 nelle cellule tumorali con espressione di FXR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.