FUT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-409559-ACT-2

O FUT2 humano codifica a α(1,2)-fucosiltransferase 2 (FUT2), uma glicosiltransferase residente no Golgi que catalisa a fucosilação terminal de glicanos para gerar o antígeno H tipo 1 e epítopos fucosilados relacionados em superfícies mucosas e em glicoproteínas secretadas. Ao controlar o status de secretor, o FUT2 modula processos dependentes de glicanos, incluindo a apresentação de antígenos ABO em secreções, a biologia da barreira epitelial e as interações hospedeiro–microrganismo que moldam a imunidade mucosa e a composição do microbioma. A variação genética ou a perda de atividade do FUT2 está associada a alterações na suscetibilidade a infecções e a fenótipos inflamatórios, e tem sido relacionada a características como risco de doença inflamatória intestinal, suscetibilidade ao norovírus e mudanças na estrutura da comunidade microbiana. A edição gênica de FUT2 e perturbações funcionais são usadas para dissecar vias de glicosilação, mapear determinantes de ligação de lectinas e patógenos e modelar como a fucosilação mucosa influencia a sinalização imune e a fisiologia epitelial em sistemas de células humanas.

FUT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FUT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FUT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FUT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FUT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FUT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FUT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FUT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FUT2 em células tumorais com expressão de FUT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.