Plásmido CRISPR de Activación (h2) FUT2: sc-409559-ACT-2

El gen humano FUT2 codifica la α(1,2)-fucosiltransferasa 2 (FUT2), una glicosiltransferasa residente del aparato de Golgi que cataliza la fucosilación terminal de glicanos para generar el antígeno H tipo 1 y epítopos fucosilados relacionados en superficies mucosas y en glicoproteínas secretadas. Al controlar el estado de secretor, FUT2 modula procesos dependientes de los glicanos, incluida la presentación de antígenos ABO en secreciones, la biología de la barrera epitelial y las interacciones huésped–microbio que configuran la inmunidad mucosa y la composición del microbioma. La variación genética o la pérdida de actividad de FUT2 se asocia con una susceptibilidad alterada a infecciones y con fenotipos inflamatorios, y se ha vinculado a rasgos como el riesgo de enfermedad inflamatoria intestinal, la susceptibilidad al norovirus y cambios en la estructura de las comunidades microbianas. La edición genética de FUT2 y su perturbación funcional se emplean para desentrañar vías de glicosilación, cartografiar determinantes de unión de lectinas y patógenos, y modelar cómo la fucosilación mucosa influye en la señalización inmunitaria y la fisiología epitelial en sistemas celulares humanos.

FUT2 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FUT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FUT2 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FUT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FUT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FUT2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FUT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FUT2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FUT2 en células tumorales con expresión de FUT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.