FucT-IV Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401795-ACT

FUT4 codifica l’α(1,3)-fucosiltransferasi IV (FucT-IV), una glicosiltransferasi localizzata nell’apparato di Golgi che catalizza la fucosilazione terminale dei glicani generando epitopi di tipo Lewis X su glicoproteine e glicolipidi. Modellando l’architettura dei glicani sulla superficie cellulare, FucT-IV influenza l’adesione mediata dalle selectine, il traffico leucocitario e, più in generale, la segnalazione dipendente dalla glicosilazione e la funzione dei recettori. L’attività di FUT4 contribuisce alla regolazione delle interazioni tra cellule immunitarie e dei processi infiammatori attraverso la modulazione di ligandi fucosilati. Un’espressione disregolata di FUT4 e pattern di fucosilazione alterati sono stati associati a fenotipi anomali di adesione e migrazione cellulare e vengono frequentemente studiati nel contesto della biologia del cancro e dell’immunopatologia.

FucT-IV Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FUT4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FucT-IV Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FUT4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FUT4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FucT-IV. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FUT4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FucT-IV nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FucT-IV nelle cellule tumorali con espressione di FUT4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.