Fucokinase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409449

Panoramica

Il gene umano **FUK** codifica la fucokinasi, una chinasi citosolica che fosforila la L-fucosio a fucosio-1-fosfato nella via di recupero (salvage) del fucosio, fornendo substrato per la biosintesi del GDP-fucosio. Contribuendo ai pool cellulari di fucosio attivato, FUK sostiene la fucosilazione di glicoproteine e glicolipidi, una modificazione che modula la segnalazione dei recettori, l’adesione cellula–cellula e il riconoscimento immunitario. Alterazioni del metabolismo del fucosio e dei pattern di fucosilazione sono state associate a infiammazione disregolata, segnalazione oncogenica e cambiamenti dell’invasività delle cellule tumorali, rendendo FUK un nodo rilevante per lo studio di fenotipi dipendenti dai glicani. L’analisi funzionale di FUK aiuta a collegare il flusso metabolico attraverso le vie degli zuccheri nucleotidici all’output delle glicosiltransferasi e ai conseguenti cambiamenti nei glicoproteomi di membrana e secreti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Fucokinase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FUK in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FUK insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FUK a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Fucokinase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FUK per lo studio della segnalazione di Fucokinase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FUK critici per la funzione di Fucokinase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FUK per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Fucokinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Fucokinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FUK. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Fucokinase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Fucokinase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FUK per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FUK definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.