Fucokinase CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-409449

개요

인간 FUK 유전자는 푸코키나아제(fucokinase)를 암호화하며, 이는 세포질에 존재하는 키나아제로서 푸코스 구제 경로(fucose salvage pathway)에서 L-푸코스를 푸코스-1-인산(fucose-1-phosphate)으로 인산화하여 GDP-푸코스 생합성에 필요한 기질을 공급합니다. FUK는 활성화된 푸코스의 세포 내 풀(pool) 형성에 기여함으로써 당단백질과 당지질의 푸코실화(fucosylation)를 지원하며, 이러한 변형은 수용체 신호전달, 세포–세포 부착, 면역 인지 등을 조절합니다. 푸코스 대사 및 푸코실화 패턴의 변화는 염증 조절 이상, 종양유발성 신호전달, 종양 세포 침습성 변화와 연관되어 보고되어 왔으며, 이에 따라 FUK는 글리칸 의존적 표현형을 연구하는 데 중요한 노드로 간주됩니다. FUK의 기능을 분석하면 뉴클레오타이드-당 경로를 통한 대사 플럭스가 당전이효소(glycosyltransferase) 산출과 연결되고, 나아가 막 및 분비 당단백체의 하위 변화로 이어지는 과정을 규명하는 데 도움이 됩니다.

Fucokinase CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 FUK 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 FUK 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 FUK의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Fucokinase 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Fucokinase 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 FUK 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Fucokinase 기능에 중요한 FUK 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 FUK 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Fucokinase CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 Fucokinase CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 FUK 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Fucokinase HDR 플라스미드 (h) 및 Fucokinase HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 FUK 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 FUK 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.