FTβ Plasmide Double Nickase (h): sc-403479-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FTβ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FTβ Double Nickase Plasmid (h) e il FTβ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FNTB. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FTβ Antibody (B-7): sc-46664
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FTβ Plasmide Double Nickase (h) | sc-403479-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FTβ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403479-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FNTB codifica la subunità β della farnesiltransferasi proteica (FTβ), un enzima chiave della via della prenilazione che catalizza il trasferimento di un gruppo farnesile alle proteine con motivo CAAX al C-terminale. Questa modifica lipidica favorisce l’associazione alla membrana, la stabilità proteica e il traffico subcellulare di numerose proteine di segnalazione, influenzando così i circuiti che controllano proliferazione, differenziamento e trasporto vescicolare. La farnesilazione dipendente da FTβ è strettamente legata alle reti di trasduzione del segnale guidate da piccole GTPasi e alla regolazione del citoscheletro. Una dinamica di prenilazione deregolata e una dipendenza alterata dall’attività della farnesiltransferasi sono state associate a contesti di segnalazione oncogenica e ad altri disturbi che coinvolgono complessi di segnalazione aberranti localizzati alla membrana.
FTβ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FNTB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FNTB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FNTB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FNTB interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.