FRRS1L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407611-ACT

FRRS1L (ferric chelate reductase 1 like) codifica una proteina neuronale associata al reticolo endoplasmatico, implicata nella maturazione e nella regolazione funzionale dei recettori del glutammato di tipo AMPA. Supportando l’assemblaggio/il traffico dei recettori e la loro localizzazione sinaptica, FRRS1L contribuisce alla neurotrasmissione eccitatoria, alla plasticità sinaptica e alle reti di segnalazione dipendenti dall’attività nel sistema nervoso centrale. L’alterazione della funzione di FRRS1L è stata collegata a fenotipi neuroevolutivi ed epilettici, in linea con una compromissione della segnalazione glutammatergica e con una modificata eccitabilità delle reti neuronali. Queste caratteristiche rendono FRRS1L un bersaglio utile per studiare la biologia della sinapsi, la proteostasi dei recettori e le vie che governano lo sviluppo neuronale e la funzione dei circuiti.

FRRS1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FRRS1L senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FRRS1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FRRS1L nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FRRS1L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FRRS1L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FRRS1L nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FRRS1L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FRRS1L nelle cellule tumorali con espressione di FRRS1L silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.