FRP-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422898

Panoramica

Frzb codifica FRP-3 (nota anche come secreted frizzled-related protein 3), un modulatore extracellulare della segnalazione Wnt che si lega ai ligandi Wnt e può attenuare l’attivazione dei recettori Frizzled. Modellando sia la trascrizione canonica dipendente da β-catenina sia le vie Wnt non canoniche, FRP-3 contribuisce alla regolazione della patterning embrionale, della morfogenesi dei tessuti e della differenziazione delle linee mesenchimali, inclusa l’omeostasi di ossa e cartilagine. Nei modelli murini, alterazioni dell’attività di FRP-3 sono state associate a cambiamenti nella dinamica della formazione ossea e nel rimodellamento della matrice extracellulare, processi spesso collegati ad anomalie dello sviluppo e a fenotipi degenerativi. Poiché la segnalazione Wnt è strettamente legata alle decisioni sul destino cellulare e al controllo della proliferazione, Frzb è ampiamente studiato in contesti in cui lo squilibrio della via contribuisce al rimodellamento tissutale associato all’infiammazione e alla biologia tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FRP-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Frzb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Frzb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Frzb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FRP-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Frzb per lo studio della segnalazione di FRP-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Frzb critici per la funzione di FRP-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Frzb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FRP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FRP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Frzb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FRP-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FRP-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Frzb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Frzb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.