FRMD6 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-435657-ACT

Frmd6 codifica la proteina murina FRMD6, un adattatore citoscheletrico contenente un dominio FERM che si associa alla membrana plasmatica e integra segnali che controllano la polarità cellulare, l’adesione e la regolazione della crescita dipendente dal contatto. FRMD6 è stata collegata alla modulazione della via di segnalazione Hippo, influenzando gli output trascrizionali di YAP/TAZ che coordinano i programmi di proliferazione e differenziamento. Attraverso questi ruoli, FRMD6 è rilevante per studi sull’organizzazione epiteliale, l’omeostasi tissutale e la meccanotrasduzione. Un’alterata espressione di FRMD6 o una deregolazione a valle della segnalazione Hippo sono state associate a fenotipi di crescita disfunzionale e a processi legati alla biologia del cancro, a supporto del suo impiego nella genomica funzionale incentrata su specifiche vie di segnalazione.

FRMD6 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Frmd6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FRMD6 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Frmd6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Frmd6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FRMD6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Frmd6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FRMD6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FRMD6 nelle cellule tumorali con espressione di Frmd6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.