fractalkine Plasmide Double Nickase (m): sc-422853-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- fractalkine Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il fractalkine Double Nickase Plasmid (m) e il fractalkine Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cx3cl1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
fractalkine Plasmide Double Nickase (m) | sc-422853-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
fractalkine Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422853-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Cx3cl1 codifica la fractalkina (CX3CL1), una chemokina CX3C unica che si presenta sia come molecola di adesione ancorata alla membrana sia come chemoattrattante solubile dopo il distacco proteolitico. Legandosi a CX3CR1, la fractalkina regola l’adesione leucocitaria, la chemiotassi e la sopravvivenza, integrando la segnalazione infiammatoria con le interazioni cellula–cellula nei compartimenti vascolare, neurale e immunitario. Questo asse modella la comunicazione microglia–neurone, il traffico dei monociti e l’attivazione endoteliale, influenzando processi quali il rimodellamento sinaptico, la sorveglianza tissutale e il reclutamento guidato dalle citochine. Una segnalazione CX3CL1/CX3CR1 deregolata è stata implicata nella neuroinfiammazione, nell’aterosclerosi e in stati infiammatori cronici, rendendo Cx3cl1 un bersaglio utile per analizzare il crosstalk tra sistema immunitario e tessuti.
fractalkine Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cx3cl1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cx3cl1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cx3cl1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cx3cl1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.