fractalkine Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422853

Panoramica

Cx3cl1 codifica la fractalkine (CX3CL1), una chemokina unica, sia ancorata alla membrana sia solubile, che segnala attraverso CX3CR1 per regolare l’adesione dei leucociti, la chemiotassi e la sopravvivenza. Nei tessuti murini, la fractalkine contribuisce alla comunicazione neuro-immunitaria modulando le interazioni tra microglia e neuroni e plasmando le risposte infiammatorie nel SNC e negli organi periferici. Questo asse si integra con programmi di traffico cellulare guidati dalle chemokine e con meccanismi di adesione che influenzano il reclutamento delle cellule mieloidi, l’infiammazione vascolare e il rimodellamento tissutale. Un’alterazione della segnalazione CX3CL1–CX3CR1 è comunemente studiata in contesti di neuroinfiammazione, patologia vascolare tipo aterosclerotica e modelli di malattie infiammatorie croniche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO fractalkine (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cx3cl1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cx3cl1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cx3cl1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina fractalkine.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cx3cl1 per lo studio della segnalazione di fractalkine, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cx3cl1 critici per la funzione di fractalkine
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cx3cl1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal fractalkine CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal fractalkine CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cx3cl1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal fractalkine Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR fractalkine (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cx3cl1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cx3cl1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.