FOXP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422896

Übersicht

Foxp3 kodiert FOXP3, einen Forkhead-/Winged-Helix-Transkriptionsfaktor, der in der Maus als zentraler Regulator der Festlegung der regulatorischen T‑Zell-(Treg)-Linie und ihrer suppressiven Funktion dient. FOXP3 steuert über Interaktionen mit Faktoren wie NFAT, RUNX1 und chromatinmodifizierenden Komplexen transkriptionelle Programme, die Immuntoleranz, Zytokin-Homöostase und Aktivierungsschwellen von T‑Zellen kontrollieren. In Immungeweben prägen FOXP3-abhängige Netzwerke die periphere Toleranz, begrenzen entzündliche Reaktionen und beeinflussen das Zusammenspiel zwischen T‑Zellen und antigenpräsentierenden Zellen. Eine Fehlregulation der Foxp3-Expression oder der FOXP3-Aktivität wird häufig als mechanistischer Ansatzpunkt genutzt, um Störungen der Immunregulation zu untersuchen, die für Autoimmunität, Allergien und Modelle entzündlicher Erkrankungen relevant sind.

Das FOXP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Foxp3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Foxp3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Foxp3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FOXP3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Foxp3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FOXP3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Foxp3-Exone abzielen, die für die FOXP3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Foxp3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FOXP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FOXP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Foxp3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FOXP3 HDR-Plasmid (m) und FOXP3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Foxp3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Foxp3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.