FOXP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422896

Panoramica

Foxp3 codifica FOXP3, un fattore di trascrizione della famiglia forkhead/winged-helix che funge da regolatore principale dell’impegno di linea delle cellule T regolatorie (Treg) e della loro funzione soppressiva nel topo. FOXP3 coordina programmi trascrizionali che controllano la tolleranza immunitaria, l’omeostasi delle citochine e le soglie di attivazione delle cellule T attraverso interazioni con fattori quali NFAT, RUNX1 e complessi di modifica della cromatina. Nei tessuti immunitari, le reti dipendenti da FOXP3 plasmano la tolleranza periferica, limitano le risposte infiammatorie e influenzano il dialogo tra cellule T e cellule presentanti l’antigene. La disregolazione dell’espressione di Foxp3 o dell’attività di FOXP3 è ampiamente utilizzata come punto di ingresso meccanicistico per studiare i cedimenti della regolazione immunitaria rilevanti per modelli di autoimmunità, allergia e malattie infiammatorie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXP3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Foxp3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Foxp3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Foxp3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FOXP3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Foxp3 per lo studio della segnalazione di FOXP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Foxp3 critici per la funzione di FOXP3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Foxp3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FOXP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FOXP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Foxp3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FOXP3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FOXP3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Foxp3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Foxp3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.