FOXP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417494-ACT

FOXP2 codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box che orchestra programmi di regolazione genica necessari per la differenziazione neuronale, la crescita dei neuriti e la plasticità sinaptica, con ruoli di rilievo nei circuiti cortico-striatali e cerebellari coinvolti nell’apprendimento motorio e nella vocalizzazione. In quanto regolatore che si lega al DNA, FOXP2 modula reti trascrizionali che controllano lo stato della cromatina, il processamento dell’RNA e la segnalazione dipendente dall’attività, che plasmano le traiettorie del neurosviluppo. La variabilità genetica o un dosaggio alterato di FOXP2 sono stati associati a compromissioni del linguaggio e della parola e a fenotipi neurosviluppativi più ampi, rendendolo un nodo utile per analizzare il controllo trascrizionale della funzione dei circuiti neurali. La modulazione sperimentale di FOXP2 supporta studi sulla specificazione di linea guidata da fattori di trascrizione e sul rimodellamento delle vie a valle in modelli cellulari umani.

FOXP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOXP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOXP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOXP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOXP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXP2 nelle cellule tumorali con espressione di FOXP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.