FOXJ1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402226-ACT

Il gene umano **FOXJ1** codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box che funge da regolatore maestro della ciliogenesi motile, coordinando l’ancoraggio dei corpi basali, l’assemblaggio dell’assonema e il programma trascrizionale necessario alla differenziazione delle cellule multiciliate. L’attività di FOXJ1 si integra con la segnalazione dello sviluppo e con le vie di differenziamento epiteliale, incluse reti trascrizionali associate alle ciglia che determinano l’identità delle cellule delle vie aeree e delle cellule ependimali. Un’espressione deregolata di FOXJ1 o dei programmi genici ciliari è collegata a una compromessa clearance mucociliare e a fenotipi più ampi legati alle ciliopatie, rendendolo rilevante per studi sull’epitelio respiratorio, sulla funzione del tratto riproduttivo e sull’omeostasi del liquido cerebrospinale. In quanto proteina nucleare che si lega al DNA, FOXJ1 rappresenta un nodo sperimentalmente accessibile per indagare come il controllo trascrizionale dei geni delle ciglia influenzi la funzione di barriera, il flusso dei fluidi e i meccanismi di difesa innata.

FOXJ1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOXJ1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXJ1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOXJ1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOXJ1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXJ1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOXJ1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXJ1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXJ1 nelle cellule tumorali con espressione di FOXJ1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.