FOXD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402521-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FOXD1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FOXD1 Double Nickase Plasmid (h) e il FOXD1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FOXD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FOXD1 Antibody (2C10): sc-293238
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FOXD1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402521-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FOXD1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402521-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXD1 codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box che regola programmi di espressione genica dipendenti dal contesto, controllando la specificazione del destino cellulare, la differenziazione e la patterning dei tessuti. Durante lo sviluppo umano, FOXD1 è particolarmente associato alle linee mesenchimali e alla morfogenesi renale, influenzando reti trascrizionali che coordinano la segnalazione stroma–epitelio, l’organizzazione della matrice extracellulare e l’organogenesi. Un’espressione deregolata di FOXD1 è stata associata ad alterazioni dell’impegno di linea e di vie di rimodellamento che intersecano il controllo del ciclo cellulare e le cascate di segnalazione dello sviluppo. In quanto proteina nucleare che si lega al DNA, FOXD1 rappresenta un nodo utile per analizzare la regolazione trascrizionale, l’attività degli enhancer e il cross-talk tra vie di sviluppo in modelli cellulari rilevanti per la malattia.
FOXD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FOXD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FOXD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FOXD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FOXD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.