follistatin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420417

Panoramica

Il gene murino **Fst** codifica la follistatina, una glicoproteina secreta che si lega ai ligandi della superfamiglia del TGF-β e li neutralizza, in particolare le activine e diverse BMP, modulando così i programmi trascrizionali dipendenti da SMAD2/3 e SMAD1/5/8. Limitando la disponibilità dei ligandi, la follistatina influenza le decisioni di destino cellulare, la crescita dei tessuti e i processi di riparazione nei sistemi muscolare, riproduttivo e metabolico. L’attività di Fst influisce sulla miogenesi e sul rimodellamento associato alla fibrosi, e lo squilibrio tra activina e follistatina è oggetto di studio in contesti di deperimento muscolare, segnalazione infiammatoria e fenotipi riproduttivi. In quanto regolatore extracellulare chiave della segnalazione dei fattori di crescita, Fst rappresenta un nodo accessibile per analizzare il crosstalk tra vie di segnalazione e i circuiti di feedback nei processi di sviluppo e di omeostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO follistatin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fst in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fst insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fst a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina follistatin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fst per lo studio della segnalazione di follistatin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fst critici per la funzione di follistatin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fst per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal follistatin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal follistatin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fst. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal follistatin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR follistatin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fst per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fst definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.