Fnk Plasmide Double Nickase (h): sc-404710-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Fnk Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Fnk Double Nickase Plasmid (h) e il Fnk Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PLK3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Fnk Plasmide Double Nickase (h) | sc-404710-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fnk Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404710-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PLK3 codifica la chinasi serina/treonina Fnk, un membro della famiglia delle chinasi polo-like implicato nelle risposte allo stress cellulare e nella segnalazione dei checkpoint. Fnk partecipa a vie che coordinano il rilevamento del danno al DNA, la progressione del ciclo cellulare e l’apoptosi, con ruoli riportati nella modulazione della segnalazione correlata alle MAPK e di altre reti dipendenti dalla fosforilazione. Regolando substrati proteici in condizioni proliferative e di stress, PLK3 contribuisce al mantenimento della stabilità genomica e a decisioni controllate sul destino cellulare. La disregolazione dell’espressione o dell’attività di PLK3 è stata associata ad alterazioni dei programmi di proliferazione e sopravvivenza rilevanti per la biologia del cancro e per altre condizioni caratterizzate da un controllo dei checkpoint difettoso.
Fnk Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PLK3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PLK3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PLK3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PLK3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.