Fnk Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419717

Panoramica

Il gene Plk3 del topo codifica la chinasi serina/treonina Fnk, un membro della famiglia delle chinasi Polo-like implicato nella segnalazione responsiva allo stress e nel controllo del ciclo cellulare. Fnk partecipa alla regolazione dei checkpoint e modula vie collegate alle risposte al danno al DNA, all’apoptosi e alla proliferazione attraverso reti di segnalazione dipendenti dalla fosforilazione. Un’alterazione dell’attività di PLK3/Fnk è stata associata a una progressione mitotica deregolata e a fenotipi di instabilità genomica rilevanti per la biologia del cancro e l’omeostasi tissutale. Queste caratteristiche rendono Plk3 un bersaglio utile per studiare la segnalazione regolata dalle chinasi, l’adattamento allo stress e le decisioni sul destino cellulare nei sistemi modello dei mammiferi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Fnk (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Plk3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Plk3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Plk3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Fnk.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Plk3 per lo studio della segnalazione di Fnk, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Plk3 critici per la funzione di Fnk
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Plk3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Fnk CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Fnk CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Plk3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Fnk Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Fnk (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Plk3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Plk3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.