Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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FLJ23356 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406964
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FLJ23356 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico FLJ23356, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FLJ23356 Antibody (S-23): sc-100433
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FLJ23356 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-406964 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
POMK (protein O-mannose kinase), noto anche come FLJ23356, codifica una chinasi localizzata nel Golgi necessaria per la fosforilazione dell’O-mannosio su α-distrogllicano, un passaggio chiave nella maturazione dei glicani che sostiene il legame alla matrice extracellulare. Questa attività opera all’interno della rete di O-mannosilazione e di glicosilazione correlata alle distroglicanopatie, intersecandosi con vie che regolano l’organizzazione della membrana basale, l’adesione cellulare e l’integrità dei tessuti muscolari e cerebrali. L’alterazione della glicosilazione dipendente da POMK compromette le interazioni tra α-distrogllicano e i suoi ligandi e perturba i complessi di segnalazione associati alla membrana. Difetti genetici in POMK sono associati a distroglicanopatie e a fenotipi di distrofia muscolare congenita, rendendolo un locus utile per modellare i meccanismi di malattia legati alla glicosilazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FLJ23356 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POMK in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POMK insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POMK a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FLJ23356.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POMK per lo studio della segnalazione di FLJ23356, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni POMK critici per la funzione di FLJ23356
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POMK per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal FLJ23356 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FLJ23356 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POMK. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal FLJ23356 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FLJ23356 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POMK per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POMK definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.