FKBP25 Plasmide Double Nickase (h): sc-410783-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FKBP25 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FKBP25 Double Nickase Plasmid (h) e il FKBP25 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FKBP3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FKBP25 Antibody (H-6): sc-374357
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FKBP25 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410783-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FKBP25 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410783-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **FKBP3** codifica **FKBP25**, un immunofilina nucleare con attività di isomerasi peptidil-prolil **cis–trans**, che funge da chaperone per il ripiegamento proteico e da scaffold nei processi associati alla cromatina. FKBP25 interagisce con il DNA e con regolatori trascrizionali per influenzare i programmi di espressione genica ed è stata collegata alla regolazione della biogenesi dei ribosomi, delle risposte al danno al DNA e della segnalazione adattativa allo stress. Attraverso queste attività, FKBP25 contribuisce al controllo della progressione del ciclo cellulare e dell’omeostasi proteica, vie spesso alterate in contesti di malattie proliferative e neurodegenerative. Un’espressione o una localizzazione alterata di FKBP3/FKBP25 è stata riportata in molteplici condizioni rilevanti dal punto di vista patologico, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per studiare il controllo nucleare della qualità proteica e la regolazione trascrizionale.
FKBP25 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FKBP3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FKBP3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FKBP3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FKBP3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.