fish Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401277

Panoramica

SH3PXD2A codifica la proteina adattatrice TKS5, un substrato di Src che funge da impalcatura per complessi di segnalazione e di regolazione dell’actina necessari alla formazione di podosomi e invadopodi. Attraverso i suoi domini SH3 e il dominio PX, TKS5 coordina dinamiche di membrana dipendenti da PI3K, la macchina di polimerizzazione dell’actina e il traffico delle metalloproteasi, a supporto del rimodellamento della matrice extracellulare e della migrazione cellulare. La riorganizzazione del citoscheletro guidata da SH3PXD2A è associata a un comportamento cellulare invasivo e ad alterazioni dell’architettura tissutale, rendendola rilevante per studi sulla progressione tumorale, sul rimodellamento associato alla fibrosi e sulla motilità delle cellule vascolari. In contesti immunitari e stromali, la perturbazione di TKS5 influisce sulle strutture di adesione e sui programmi di migrazione direzionale che intersecano la segnalazione Src/FAK e le vie delle GTPasi della famiglia Rho.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO fish (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SH3PXD2A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SH3PXD2A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SH3PXD2A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina fish.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SH3PXD2A per lo studio della segnalazione di fish, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SH3PXD2A critici per la funzione di fish
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SH3PXD2A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal fish CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal fish CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SH3PXD2A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal fish Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR fish (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SH3PXD2A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SH3PXD2A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.