fish Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401277
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- fish El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico fish, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: fish Anticuerpo (G-7): sc-376211
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
fish Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401277 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SH3PXD2A codifica la proteína adaptadora TKS5, un sustrato de Src que sirve de andamiaje para complejos de señalización y regulación de actina necesarios para la formación de podosomas e invadopodios. A través de sus dominios SH3 y su dominio PX, TKS5 coordina la dinámica de membrana dependiente de PI3K, la maquinaria de polimerización de actina y el tráfico de metaloproteasas para favorecer la remodelación de la matriz extracelular y la migración celular. La reorganización del citoesqueleto impulsada por SH3PXD2A se asocia con un comportamiento celular invasivo y con una arquitectura tisular alterada, por lo que resulta relevante en estudios sobre progresión tumoral, remodelación asociada a fibrosis y motilidad de células vasculares. En contextos inmunitarios y estromales, la alteración de TKS5 afecta a las estructuras de adhesión y a los programas de migración direccional que convergen con la señalización de Src/FAK y las vías de GTPasas de la familia Rho.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO fish (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SH3PXD2A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SH3PXD2A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SH3PXD2A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína fish.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SH3PXD2A para la investigación de la señalización de fish, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SH3PXD2A críticos para la función de fish
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SH3PXD2A para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido fish CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido fish CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SH3PXD2A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR fish (h) y el plásmido HDR fish (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SH3PXD2A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SH3PXD2A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.