Plasmide Double Nickase (h) FIP1L1: sc-413438-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FIP1L1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FIP1L1 Double Nickase (h) et le plasmide FIP1L1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FIP1L1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FIP1L1 Antibody (C-10): sc-398392
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FIP1L1 | sc-413438-NIC | 20 µg | $410.00 |
FIP1L1 code une sous-unité essentielle du complexe CPSF (Cleavage and Polyadenylation Specificity Factor), qui participe au traitement de l’extrémité 3′ des pré-ARNm, notamment au choix du site de poly(A) et au couplage du clivage à la polyadénylation. Par ses interactions avec la poly(A) polymérase et d’autres facteurs de maturation, FIP1L1 contribue à façonner la diversité des isoformes de transcrits et la stabilité des ARNm, influençant ainsi des programmes d’expression génique liés à la prolifération et à la différenciation. La dérégulation du traitement de l’ARN médié par FIP1L1 est pertinente pour la reprogrammation transcriptionnelle oncogénique, et les réarrangements chromosomiques impliquant FIP1L1 sont bien décrits dans les néoplasies myéloïdes comme des facteurs de signalisation kinase aberrante. Ces caractéristiques font de FIP1L1 un nœud utile pour étudier la formation de l’extrémité 3′ des ARN, la polyadénylation alternative et les conséquences en aval sur l’état cellulaire.
FIP1L1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FIP1L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FIP1L1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FIP1L1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FIP1L1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.