FIP1L1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413438

Panoramica

FIP1L1 codifica una subunità centrale del complesso CPSF (cleavage and polyadenylation specificity factor), che contribuisce a definire i siti di processamento dell’estremità 3′ dei pre-mRNA e coordina l’aggiunta della coda poli(A). Attraverso interazioni con fattori di poliadenilazione e con il macchinario di processamento accoppiato all’RNA polimerasi II, FIP1L1 contribuisce alla maturazione dei trascritti, alla loro stabilità e a programmi regolati di espressione genica. Un’alterazione della funzione di FIP1L1 è rilevante per la disregolazione del processamento dell’RNA ed è stata implicata nella biologia delle neoplasie ematologiche, in particolare tramite il riarrangiamento FIP1L1–PDGFRA osservato in alcune neoplasie mieloidi. Di conseguenza, FIP1L1 viene spesso studiato nei pathway che collegano la formazione dell’estremità 3′ dell’mRNA a proliferazione cellulare, differenziamento e output trascrizionali responsivi allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FIP1L1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FIP1L1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FIP1L1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FIP1L1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FIP1L1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FIP1L1 per lo studio della segnalazione di FIP1L1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FIP1L1 critici per la funzione di FIP1L1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FIP1L1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FIP1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FIP1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FIP1L1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FIP1L1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FIP1L1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FIP1L1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FIP1L1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.