Fibulin-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-401978-NIC

EFEMP1 kodiert Fibulin-3, ein sezerniertes Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das mit Netzwerken elastischer Fasern sowie der Architektur der Basalmembran assoziiert ist. Fibulin-3 moduliert Zell–Matrix-Interaktionen, Gewebeumbau und das Gleichgewicht von Proteasen, einschließlich der Regulation der Metalloproteinase-Aktivität und des Signalweg-Crosstalks mit Pfaden wie TGF-β und EGFR, die Adhäsion, Migration und Stressantworten beeinflussen. Die EFEMP1-Expression steht mit der Homöostase der extrazellulären Matrix in okulären, vaskulären und epithelialen Geweben in Zusammenhang, und ihre Dysregulation wurde in Kontexten untersucht, die mit aberranter Matrixablagerung, beeinträchtigter Proteostase und veränderter angiogener Signalgebung einhergehen. Diese Eigenschaften machen EFEMP1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien des ECM-getriebenen Zellverhaltens und mikroenvironment-abhängiger Phänotypen.

Fibulin-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EFEMP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EFEMP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EFEMP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EFEMP1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.