Fibulin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420294

Panoramica

Fbln1 codifica la fibulina-1, una glicoproteina secreta della matrice extracellulare che si associa alle membrane basali e alle fibre elastiche per regolare l’assemblaggio della matrice, l’elasticità tissutale e la segnalazione cellula–matrice. La fibulina-1 interagisce con componenti strutturali e adesivi quali fibronectina, laminine e proteoglicani, influenzando la dinamica delle adesioni focali, la migrazione cellulare e la meccanotrasduzione. Nei modelli murini, un’alterata espressione di Fbln1 o la sua incorporazione nella matrice è stata collegata a difetti nell’organizzazione vascolare e del tessuto connettivo, nonché a processi di rimodellamento rilevanti per la fibrosi e per cambiamenti stromali associati ai tumori. Queste funzioni rendono la fibulina-1 un nodo utile per analizzare l’omeostasi della matrice extracellulare e il controllo microambientale dei fenotipi cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fbln1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fbln1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fbln1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Fibulin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fbln1 per lo studio della segnalazione di Fibulin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fbln1 critici per la funzione di Fibulin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fbln1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fbln1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Fibulin-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Fibulin-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fbln1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fbln1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.