Fibromodulin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401610-LAC

FMOD codifica la fibromodulina, un piccolo proteoglicano ricco di leucina secreto nella matrice extracellulare, dove si lega ai collageni e regola la fibrillogenesi, l’assemblaggio della matrice e le proprietà meccaniche dei tessuti. La fibromodulina modula la segnalazione attraverso vie dei fattori di crescita, inclusi segnali della famiglia TGF-β, influenzando programmi di adesione, migrazione e differenziamento cellulare rilevanti per l’omeostasi del tessuto connettivo. Un’espressione alterata di FMOD o una diversa localizzazione nella matrice è stata associata a fenotipi di rimodellamento osservati in fibrosi, osteoartrosi e stroma associato ai tumori, rendendola un utile punto di partenza per studiare il comportamento cellulare guidato dalla matrice extracellulare. In quanto componente della matrice con interazioni regolatorie, la fibromodulina viene spesso esaminata in modelli di riparazione delle ferite, angiogenesi e meccanotrasduzione.

Le particelle di attivazione lentivirale Fibromodulin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FMOD in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Fibromodulin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FMOD, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Fibromodulin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FMOD e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.