Fibrinogen α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400793

Panoramica

FGA codifica la catena α del fibrinogeno, una glicoproteina secreta di origine epatica che si assembla con le catene β e γ per formare il fibrinogeno, precursore solubile della fibrina. In seguito a una lesione vascolare, il clivaggio del fibrinogeno mediato dalla trombina avvia eventi di polimerizzazione e reticolazione che stabilizzano i coaguli e favoriscono l’adesione piastrinica all’interno della cascata della coagulazione. La fibrina (e il fibrinogeno) partecipa inoltre al rimodellamento della matrice extracellulare e alla segnalazione infiammatoria attraverso interazioni con integrine e altri recettori, collegando l’emostasi alla riparazione delle ferite. Alterazioni della funzione o dell’espressione di FGA sono associate ad anomalie quantitative o qualitative del fibrinogeno che influenzano la formazione del coagulo e possono modificare i fenotipi trombotici o emorragici, rendendolo rilevante per studi sulla biologia della coagulazione e sull’infiammazione vascolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibrinogen α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FGA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FGA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FGA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Fibrinogen α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FGA per lo studio della segnalazione di Fibrinogen α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FGA critici per la funzione di Fibrinogen α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FGA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Fibrinogen α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Fibrinogen α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FGA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Fibrinogen α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Fibrinogen α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FGA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FGA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.