fibrillin-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401449-LAC

FBN1 codifica la fibrillina-1, una principale glicoproteina della matrice extracellulare che si assembla in microfibrille e sostiene l’architettura delle fibre elastiche nei tessuti connettivi. La fibrillina-1 contribuisce alle proprietà meccaniche dei tessuti e all’organizzazione della matrice, e modula la segnalazione sequestrando complessi latenti di TGF-β e influenzando programmi trascrizionali a valle dipendenti da SMAD. Attraverso questi ruoli strutturali e di segnalazione, FBN1 influisce sulle interazioni cellula–matrice, sulla meccanotrasduzione e sul rimodellamento della matrice extracellulare. Alterazioni genetiche e funzionali di FBN1 sono fortemente associate a fenotipi ereditari del tessuto connettivo e a un’attività deregolata della via del TGF-β, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici nella biologia vascolare, muscoloscheletrica e oculare.

Le particelle di attivazione lentivirale fibrillin-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FBN1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale fibrillin-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FBN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di fibrillin-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FBN1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.