fibrillin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420296

Panoramica

Il gene murino Fbn1 codifica la fibrillina-1, una principale glicoproteina della matrice extracellulare che si assembla in microfibrille per fornire l’impalcatura delle fibre elastiche e regolare la biomeccanica dei tessuti. Le microfibrille di fibrillina-1 coordinano la biodisponibilità dei fattori di crescita, in particolare modulando il sequestro del complesso latente del TGF-β e gli output di segnalazione che influenzano l’omeostasi vascolare, scheletrica e dei tessuti connettivi. Attraverso queste interazioni tra matrice e segnalazione, Fbn1 incide su processi quali l’organizzazione della matrice extracellulare, la meccanotrasduzione e la morfogenesi dello sviluppo. L’alterazione della funzione della fibrillina-1 è ampiamente utilizzata per modellare microfibrillopatie e fenotipi del tessuto connettivo rilevanti per il rimodellamento cardiovascolare e l’integrità muscoloscheletrica nei sistemi sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO fibrillin-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fbn1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fbn1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fbn1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina fibrillin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fbn1 per lo studio della segnalazione di fibrillin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fbn1 critici per la funzione di fibrillin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fbn1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal fibrillin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal fibrillin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fbn1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal fibrillin-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR fibrillin-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fbn1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fbn1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.