FHR-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416510-ACT

CFHR1 codifica la proteina 1 correlata al fattore H del complemento (FHR-1), un regolatore solubile della via alternativa del complemento che modula l’attività della C3 convertasi e determina l’amplificazione dell’attivazione del complemento su superfici dell’ospite e microbiche. Competendo con il fattore H del complemento e interagendo con componenti del complemento, FHR-1 influenza l’opsonizzazione, la segnalazione infiammatoria e la gestione dei complessi immuni, collegando la sorveglianza immunitaria innata all’omeostasi tissutale. La variazione genetica o l’espressione alterata di CFHR1 è associata a fenotipi di disregolazione del complemento ed è stata studiata in contesti quali la sindrome emolitico-uremica atipica, la glomerulopatia da C3, la degenerazione maculare legata all’età e altre patologie renali e oculari guidate dall’infiammazione. Di conseguenza, CFHR1 è ampiamente utilizzato in studi meccanicistici sul controllo del complemento, sulla regolazione immunitaria extracellulare e sulle vie di danno a valle.

FHR-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CFHR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FHR-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CFHR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CFHR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FHR-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CFHR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FHR-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FHR-1 nelle cellule tumorali con espressione di CFHR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.