FHL-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402930-ACT

Il gene umano **FHL2** codifica **FHL-2**, una proteina adattatrice contenente domini LIM che agisce come co-regolatore trascrizionale e scaffold, collegando segnali di trasduzione a programmi di espressione genica. FHL-2 interagisce con vie che controllano l’organizzazione del citoscheletro, l’adesione cellulare e la meccanotrasduzione, e può modulare in modo dipendente dal contesto gli output trascrizionali a valle delle vie di segnalazione **Wnt/β-catenina**, **TGF-β/SMAD** e **MAPK**. Attraverso interazioni con recettori nucleari e altri fattori di trascrizione, FHL-2 contribuisce alla regolazione della proliferazione, della differenziazione e del rimodellamento in risposta allo stress. Un’espressione deregolata di FHL2 e un’alterata integrazione con queste vie sono state riportate in diversi contesti rilevanti per la malattia, inclusi la biologia tumorale, i processi legati alla fibrosi e il rimodellamento cardiovascolare, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici.

FHL-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FHL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FHL-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FHL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FHL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FHL-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FHL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FHL-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FHL-2 nelle cellule tumorali con espressione di FHL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.