FGF-BP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404956-ACT

FGFBP1 codifica la fibroblast growth factor–binding protein 1 (FGF-BP), un trasportatore secreto che mobilizza i FGF legati all’eparina dalla matrice extracellulare e aumenta la biodisponibilità della segnalazione mediata da FGF. Potenziando le interazioni ligando–recettore, FGF-BP può influenzare processi collegati a MAPK/ERK e PI3K/AKT, tra cui proliferazione cellulare, migrazione e rimodellamento angiogenico nei microambienti tissutali. Un’espressione alterata di FGFBP1 è stata riportata in molteplici contesti patologici ed è spesso studiata come modulatore di fenotipi guidati dai fattori di crescita, della dinamica della matrice extracellulare e della comunicazione stroma–epitelio. Queste proprietà rendono FGFBP1 un nodo utile per studi meccanicistici sulla regolazione della via FGF e sul contributo del proteoma secreto ai cambiamenti dello stato cellulare.

FGF-BP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FGFBP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FGF-BP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FGFBP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FGFBP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FGF-BP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FGFBP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FGF-BP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FGF-BP nelle cellule tumorali con espressione di FGFBP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.